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什么是PCR实验室?

标准的PCR 实验室分为四个区域,别离为:

n1.试剂制作区;

n2.样品处理区;

n3.核酸扩增区;

n4.产品分析区;

如运用全自动分析仪,区域可适当兼并。

怎么建一个标准的PCR 实验室?PCR实验室怎么规划规划才可谓专业?PCR实验室办理又有哪些留心要害?本文让你从0开端搞懂PCR实验室规划规划。

(进入各作业区域有必要严峻依照单一方向进行,不同的作业区域运用不同的作业服,例如不同的色彩。作业人员脱离各作业区域时,不得将作业服带出)

一、PCR实验室平面布局【各区的功用别离为】

试剂准备区:扩增试剂的制作、分装和保存。    

样品处理区:样品挂号、分装;核酸提取、保存和加样。    

扩增产品分析区:扩增产品的测定、效果分析、挂号及陈述。  

扩增前区与扩增后区应严峻分隔,须运用不同的房间,两区之间最好有必定的间隔。

运用商品化试剂盒可在样品处理区进行少数试剂制作。    

在满足下列操作和清洁处理要求的前提下样品处理区和试剂准备区可设在同一房间内:    

在生物安全柜内操作;    

每个实验人员、实验组别离运用各自的试剂及耗材;    

盛放污染材料的器皿密封并一次性运用;  

用有用的方法对操作区域和同享器具在实验前后进行清洁及消毒。

二、PCR实验室制作规划要害1、主体结构:

主体为彩钢板、铝合金型材。室内全部阴角、阳角均选用铝合金50内圆角铝,然后处理简略污染、积尘、不易打扫等问题。结构健壮,线条简明,美观大方,密封性好。

2、标准的三区分隔和气压调理:

将PCR进程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增检测三个独立的实验区。整个区域有一个整体缓冲走廊。每个独立实验区设置有缓冲区, 一同各区通过气压调理,使整个PCR实验进程中试剂和标本免受气溶胶的污染并下降扩增产品对人员和环境的污染。

可打开缓冲区Ⅰ,缓冲区Ⅱ和 PCR 扩增区的排风扇往外排气,在实验区的外墙上和各扇门上都设备有风量可调的回风口,空气通过回风口向室内换气。

3、 消毒:

在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部设备有紫外灯,供消毒用。

在试剂准备区和标本制备区 还设置移动紫外线灯,对实验桌进行局部消毒。

4、机械连锁不锈钢传递窗:

试剂和标本通过机械连锁不锈钢(不主张运用电子连锁方法)传递窗传递,保证试剂和标本在传递进程中不受污染(人物分流)

5、 地上

地上主张运用PVC卷材地上或自流坪地上,整体性好。便于进行打扫,耐腐蚀。没有条件的也可选用水磨石地上,或大块的瓷砖(至少800mm×800mm)接缝需求小于2mm。

6、照明

灯具要选用净化灯具,能到达便于清洗、不积尘的特征。

三、在制作的进程中应留心:

●标准的设备流程和全面的服务流程。

●严峻依照标准科学规划的设备流程。

●设备前需求确定以下设备条件,如:电源电压,电源进线方位,电话网络线进线方位,进水水压,最小设备空间,地上平整度,通风孔、进水管和下水管的方位等,抱负情况的空间标准和通风口标准。

规划要害:

PCR实验室可以是松散方法,也可以是组合方法。完结一组PCR实验,一般应通过试剂制作、样品处理、核酸扩增及产品分析四个实验进程,若实验工艺需求,还应添加样品粉碎进程。

1.松散方法PCR实验室

所谓松散方法PCR实验室,是指完结上述实验进程的实验用房互相相距较远,呈松散安顿方法。关于这种安顿方法的PCR实验室,因为各个实验之间不易互相搅扰,因而无需特殊条件要求。

2.组合方法PCR实验室

所谓组合方法PCR实验室, 是指完结PCR四个实验进程的实验用房相邻安顿,组成独立实验区域的方法。关于组合方法PCR实验室,因为各个实验间集中安顿,简略构成互相搅扰,因而,对总体布局以及屏障系统具有必定的要求。各室在入口处设缓冲间,以减少室表里空气交流。

一些经历:试剂制作室及样品处理室宜呈微正压,以防外界含核酸气溶胶的空气进入,构成污染;可以通过控制进风风量大于排风风量到达正压效果。

核酸扩增室及产品分析室应呈微负压,以防含核酸的气溶胶扩散出去污染试剂与样品,可以通过控制排风风量大于进风风量到达负压效果。  

在抱负情况下,PCR实验室缓冲间内,可设置正压,使室内空气不流向室外,室外空气不流向室内。 PCR实验室进风由原有中央空调控制,要求将中央空调风口设备到指定定点,且高度为地上铺装好后2600mm处。

假如运用荧光PCR仪,扩增室和产品分析室可以兼并。

若房间进深答应,可设PCR内部专用走廊。需求指出的是在减少室表里空气交流方面,缓冲间比专用走廊更有意义。

各个区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流,构成单向流程的保护屏障,避免实验之间的互相搅扰,避免核酸气溶胶对实验进程构成污染产生假性效果。

实验室的墙体,包含顶棚,应结构健壮、气密性好;全部阴角宜选用圆弧形线条过渡;墙体内壁亮光、不吸附、耐腐蚀、易清洗消毒;地上材料应满足无缝隙、无渗漏、亮光、耐腐蚀的要求。

四、PCR实验室主要设备试剂准备区 :

仪器设备主要有冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平缓离心机等,加样器、天平除了要专用外,还应有定期校准。   试剂分装应在超净台中进行  扩增反响混合液应运用分子生物学级的,试剂制备好后应有质检:一是否有污染、二是检测试剂的扩增效果。

标本制备区:

仪器设备主要有生物安全柜、加样器、离心机、温育仪、混匀器等

扩增区:

扩增区的主要仪器是核酸扩增仪、超净台、微量加样器、离心机、可移动紫外灯。扩增仪需进行校准。并配备UPS电源,以避免因为电压的动摇,停电对扩增效果的影响。

分析区:

本区所运用的仪器设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等 洁净实验区的缓冲间部分面积不能超过主实验室的八分之一,这是有规则的。

一些琐碎的、不可忽略的规划1.实验室空调通风系统规划及压力控制

PCR实验室并没有严峻的净化要求,但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性,宜选用全送全排的气流组织方法。一同,要严峻控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。

2.污染的防范与控制  

PCR实验室规划的中心问题是怎么避免污染。在实践作业中,常见的有以下几种污染类型:扩增产品的污染;天然基因组DNA的污染;试剂的污染以及标本间的污染。因为一旦发生污染,实验就有必要间断,直到找到污染源为止,并且实验效果有必要报废,需重新进行实验。所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时并且繁琐,糟蹋人力物力。因而要避免污染,首要应是防范,而不是打扫。

3.PCR实验室不可短少的严峻办理

(1)严峻控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室,有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门;

(2)尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。

(3)扩增产品分析区是最主要的扩增产品污染来历,废液不能在实验室中倾倒,有必要经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的当地弃掉,用过的吸头号一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后一致处理,如焚烧等;

(4)扩增产品分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质,应特别留心实验人员的安全防护。 3.5完备的实验室配套设备  完备的实验室配套设备是保证实验作业的必要条件,应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器,如超净作业台、离心机、加样器等。


资料来源:广州特耐苏净化设备有限公司 http://www.gdzhtc.com
日期:2019-07-10 人气:231
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