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食品中菌落总数的测定

实验原理

平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释后,其中的微生物充分分散为单个细胞,取一定量的稀释液接种到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。实验室家具,该方法主要缺点是由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞,因此培养后的一个单菌落也可能来自样品中的多个细胞,导致平板菌落计数的结果往往偏低。为了更好地述平板菌落计数的结果,现在已倾向使用菌落形成单位( colony- forming units,CrFU)用于表示样品的活菌含量,可以获得活菌的信息,所以被广泛用于生物制品检验以及食品、饮料和水等含菌指数或污染度的检测

试剂和材料

恒温培养箱:(36℃1℃,30℃:1℃均质器或振荡器

无菌吸管:1mL(0.0mL刻度)、10mL(0.ImL刻度)或微量移液器及吸头

无菌锥形瓶:容量250mL、500mL

无菌培养皿:直径90nmn

菌落计数器。

主要样品

①平板计数琼脂( plate

count agar,PCA)培养基:蛋白陈50g、酵母浸膏25g葡萄糖1.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1000mL、pH7.002将所有成分加于蒸馏水中,煮沸溶解,调节pH。分装试管或锥形瓶,121℃高压灭菌15min,注:用平板计数琼脂,称取23.5g于100oL蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解,121℃高压灭菌20min,冷却至45~47℃左右备用。

②无菌生理盐水:称取5.875 Nacl溶于50mL蒸馏水中,121℃高压灭菌20min

主要器材

无菌平皿、天平、称样瓶、记号笔、酒精灯等。

操作及实验步骤

①样品的稀释:25g(mL)样品+225mL.稀释液,均质10倍系列稀释。每递增稀释一次,换用1次1mL无菌吸管或吸头(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)。选择2-3个适宜稀释度的样品匀液,各取1mL分别加入无菌培养皿内。吸取1mL空白稀释液作空白对照。每皿中加入15~20mL平板计数琼脂培养基,并转动平皿使其混合均匀。

②培养:待琼脂凝固后,将平板翻转,36℃±1℃培养48h2h。水产品30℃ェ1℃培养72h±3h(如果有弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖薄层琼脂培养基(约4mL),凝固后翻转平板)。

③菌落计数:记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位colony- forming units,CFU)表示。

计算公式:

式中N样品中菌落数

C平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和;

第一稀释度(低稀释倍数)平板个数

n2一一第二稀释度(高稀释倍数)平板个数;

d一稀释因子(第一稀释度)


资料来源:广州特耐苏净化设备有限公司 http://www.gdzhtc.com
日期:2019-07-07 人气:224
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