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洁净实验室实验原理

洁净实验室实验原理

总大肠菌群可用多管发酵法或滤膜法检验。多管发酵法的原理是根据大肠菌群能发酵乳糖、产酸、产气,以及具备革兰氏染色阴性,无芽孢,呈杆状等有关特性,通过三个步骤进行检验求得水样中的总大肠菌群数。试验结果以最可能数(mostrotable number.

主要使用仪器

①高压蒸气灭菌器。

②恒温培养箱、冰箱。

③生物显微镜、载玻片。

④酒精灯、镍铬丝接种棒。

⑤培养皿(直径100m)、试管(5mmx150m),吸管(ImL、5mL、10mL)、烧杯(200mL、50omL、200mL)、锥形瓶(500mL、100mL)、采样瓶。

培养基及染色剂的制备

(1)乳糖蛋白胨培养液将10g蛋白胨、3g牛肉膏、5g乳糖和5g氯化钠加热溶解于100onL蒸馏水中调节溶液pH为7.2-7.4,再加入1.6%甲酚紫乙醇溶液1mL,充分混匀,分装于试管中,于121℃高压灭菌器中灭菌15min,贮存于冷暗处备用。

(2)三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液按上述乳糖蛋白陈培养液的制备方法配制。除蒸馏水外,各组分用量增加至三倍

品红亚硫酸钠培养基

①贮备培养基的制备。于2000mL烧杯中,先将20-30g琼脂加到900mL蒸馏水中,加热溶解,然后加人3.5g磷酸氢二钾及10g蛋白胨,混匀,使其溶解,再用蒸馏水补充到1000mL,调节溶液pH为7.2~7.4。趁热用脱脂棉或绒布过滤再加入10g乳糖,混匀,定量分装于250mL或500mL锥形瓶内,置于高压灭菌器中,在121℃灭菌15min,贮存于冷暗处备用。

②平皿培养基的制备。将上法制备的贮备培养基加热融化。根据锥形瓶内培养基的容量,用灭菌吸管按比例吸取一定量的5%碱性品红乙醇溶液,置于灭菌试管中;再按比例称取无水亚硫酸钠,置于另一灭菌试管内,加灭菌水少许使其溶解,再置于沸水浴中煮沸10min(灭菌)。用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液,滴加于碱性品红乙醇溶液内至深红色再褪至淡红色为止(不宜加多)。将此混合液全部加入已融化的贮备培养基内,并充分混匀(防止产生气泡)。立即将此培养基适量(约15mL)倾入已灭菌的平皿内,待冷却凝固后,置于冰箱内备用,但保存时间不宜超过两周。如培养基已由淡红色变成深红色,则不能再用。


资料来源:广州特耐苏净化设备有限公司 http://www.gdzhtc.com
日期:2019-07-04 人气:220
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