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​洁净实验室无菌操作技术

洁净实验室无菌操作技术

在微生物的分离和培养过程中,必须使用无菌操作技术。所谓无菌操作技术,就是在分离、接种、移植等各个操作环节中,必须保证在操作过程中杜绝外界环境中的杂菌进入培养的容器或系统内,避免污染培养物。无菌操作技术广泛应用于微生物、组织培养及基因工程等领域。无菌操作技术,简单地说就是在无菌环境中进行的操作,为保证获得纯净的培养物,需要考虑各种因素的影响。

培养基灭菌

般采用高压灭菌,将培养基放在高压锅中,排净冷空气后,在121℃灭菌20-30min,保证培养基处于无菌状态。

创造无菌接种环境

无菌操作必须在无菌条件下进行。常见的无菌场所有净化工作台、接种箱和接种室。在进行操作前需将灭菌后的培养基以及接种用的酒精灯、工具等,放到接种场所,然后采用物理或化学方法进行环境处理。

①净化工作台:操作前用75%的酒精棉球擦拭台面,然后打开紫照射消毒,并打开风机吹20-30min.将台面上含有杂菌的空气排除,保持台面处于无菌状态。

②接种箱:操作前按照每立方米空间用10~14mL甲盛和5~10%高锰酸进行混合照蒸,质藻时间不少于30min。或用市售气雾消毒剂进行蒸,自立方米空问用4~5g。接种箱中如有素外线灯时,同时打开。

③接种室:灭菌方法同接种箱。为避免药害,接种前可以酒甲用量1n的氨水来中和残留的甲盛。

(3)手消毒先用肥皂水洗手,再用75%的酒精棉球擦拭手表面。

(4)工具灭菌点燃酒精灯,将接种工具在酒精灯外焰上充分灼烧,杀死工具表面附着的杂菌工具灭菌后不得再接触台面。

(5)无菌操作(以转管为例)左手拿一支母种和一支空白PDA培养基,右手拿灭菌后的接种钩,将两个塞同时拔掉,夹在右手的无名指和小拇指、小指和掌根之间,不可将棉塞放到台面上。按掉棉塞后,试管口要在酒精灯火焰上方3-5cm处,利用火焰封口

然后用接种钩切取少量母种,迅速通过酒精灯火焰,放到空白培养基斜面中央,轻压以防止滑动。最后塞好棉。

(6)培养将接种后的菌种放到适宜的环境条件下培养。培养环境要注意消毒,防止培

养过程中杂菌侵染菌种。

(7)检查培养过程中要经常检查菌丝生长情况,发现有杂菌污染的菌种要及时挑出。

在进行微生物分离纯化以及其它无菌操作时,主动培养自己的无菌意识,加强训练,提高熟练程度,降低污染率。



资料来源:广州特耐苏净化设备有限公司 http://www.gdzhtc.com
日期:2019-06-29 人气:194
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